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熱愛ELISA實(shí)驗(yàn)的新手們需注意這些細(xì)節(jié)
更新時(shí)間:2018-11-28 點(diǎn)擊次數(shù):1747

    今天,我公司技術(shù)專員特意為大家準(zhǔn)備十幾條ELISA操作的重點(diǎn)細(xì)節(jié),閱讀之后可以總結(jié)一下您在實(shí)驗(yàn)中有哪些重點(diǎn)被忽略掉了。熱愛ELISA實(shí)驗(yàn)的新手們需注意這些細(xì)節(jié):
 

  1.不管是試劑盒,還是其它產(chǎn)品,在使用之前我們都要仔細(xì)閱讀說明書。
  2.同樣的,一定要確定試劑盒是不是在有效期內(nèi)。
  3.按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)。
  4.標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者,注意低溫保存。
  5.ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號和低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí),應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
  6.標(biāo)準(zhǔn)品的配制:對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前,瞬時(shí)離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
    
  7.一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml??衫脴?biāo)準(zhǔn)的elisa操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
  8.根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。
  9.按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑,DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南。
  10.選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對;若選擇兩個(gè)單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。
  11.為了優(yōu)化靈敏度,建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。
  12.若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
  13.當(dāng)測定混合液體中的抗原時(shí),如血清,建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。
  14.準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等。
   

    了解更多ELISA實(shí)驗(yàn)技術(shù)資料,歡迎您致電給我公司業(yè)務(wù)員咨詢。

 

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