蜜臀久久99精品久久久久久丨国产成人av国语在线观看丨狠狠五月激情六月丁香丨亚洲国产精品丝袜国产自在线丨午夜视频在线观看一区丨午夜理理伦电影a片无码丨亚洲特级毛片丨国产内射爽爽大片丨国内揄拍高清国内精品对白丨夫妇交换性三中文字幕丨亚洲高清国产拍精品动图丨日本公妇乱淫hd丨国产成人综合在线丨国产黄色在线丨香蕉视频在线看丨92看片淫黄大片一级丨91av在线播放视频丨九九九网站丨欧美国产在线观看丨自拍成人福利视频免费在线观看丨精品爽爽久久久久久蜜臀丨看免费黄色大片丨99热久久这里只有精品丨国产人妻精品无码av在线丨欧美片免费网站

1. 包被過程(注意設置空白對照,陰性對照):

將所用抗原用包被稀釋液稀釋到適當濃度(一般所需抗原包被量為每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl, 置37℃,4h,或4℃,24h;棄去孔中液體.(為避免蒸發,板上應加蓋或將板平放在底部有濕紗布的金屬濕盒中)

2. 封閉酶標反應孔:

5%小牛血清置37℃封閉40min.封閉時將封閉液加滿各反應孔,并去除各孔中的氣泡,封閉結束后用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.

洗滌方法:吸干孔內反應液,將洗滌液注滿板孔,放置2min略作搖動,吸干孔內液,傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌次數3次

3. 加入待檢測樣品(建立合適的濃度梯度):

檢測時一般采用1:50-1:400的稀釋度, 應采用較大稀釋體積進行,一般保證樣品吸取量>20μl.

將稀釋好的樣品加入酶標反應孔中,每樣品至少加雙孔, 每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.

4. 加入酶標抗體:

酶標抗體: 根據酶結合物提供商提供的參考工作稀釋度進行. 37℃,30-60min之間.短于30min往往結果不穩定.每孔加100μl.洗滌同前。

5. 加入底物液(現用現配):

shou選TMB-過氧化氫尿素溶液,OPD-過氧化氫底物液系統次之.

底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分鐘,加入終止液顯色.

6. 終止反應:

每孔加入終止液50μl終止反應,于20min內測定實驗結果.

7. 結果判斷:

OPD顯色后采用492nm波長,TMB反應產物檢測需要450nm波長.檢測時一定要首先進行空白孔系統調零.用測定標本孔的吸收值與一組陰性標本測定孔平均值的比值(P/N)表示,當P/N大于2時作為抗體的效價.(數值的大小依具體檢測要求而定.)