目前，細胞凍存zui常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法，主要采用加適量保護劑的緩慢冷凍法凍存細胞。細胞在不加任何保護劑的情況下直接冷凍，細胞內(nèi)外的水分會很快形成冰晶，從而引起一系列不良反應(yīng)。
正確細胞凍存的方法：
1．細胞：選對數(shù)生長期細胞，收集細胞24小時前換液一次。
2．計數(shù)：按常規(guī)方法把細胞制成細胞懸液，計數(shù)，令細胞密度達5×106/ml，離心去上清，吸入離心管中。
3．凍存液：先用培養(yǎng)液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO凍存液，按上法一滴滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。
4．分裝：分裝入無菌安剖中，每安剖加1.5毫升細胞懸液。
5．封口：用塑料安剖時擰緊瓶口即可；如用火焰封閉安剖口后，仔細檢查，定要封嚴(yán)，必要時可浸入藍色液中觀察，為安全起見，把安剖縫入紗布小袋中，以防液氮浸入后，融解時因受熱發(fā)生爆炸傷人；紗袋一端系以線繩，末端扎有小牌，注明：細胞名稱，凍存日期，以便日后查找。
